Projets de recherche

Plus de manip guidée pas à pas : un objectif scientifique, une paillasse complète et des témoins à ne pas oublier. Vous choisissez la stratégie et l'ordre des expériences ; la note finale évalue les objectifs atteints, la rigueur, les contrôles, l'usage des instruments et la tenue du cahier de labo.

• Clone le gène GFP dans pUC19 et vérifie ta constructionUn clonage complet, de l'amplification du gène EGFP à la preuve de séquence. L'insert est amplifié avec des amorces portant une queue EcoRI, inséré dans le site EcoRI unique de pUC19 (au cœur de lacZα) et la construction est vérifiée deux fois : par digestion sur gel et par séquençage Sanger.intermédiaire 8 objectifs3 témoinsPCRÉlectrophorèse sur gel d'agaroseEnzymes de restrictionClonage dans pUC19Culture et miniprepSéquençage Sanger
• Inactive lacZ et prouve-leChez E. coli, une coupure Cas9 non réparée est létale : sans NHEJ ni système λ-Red, les moteurs du labo ne simulent pas l'édition du chromosome bactérien. Le projet applique donc la même logique de perte de fonction à une cible réellement simulée : le rapporteur lacZα de pUC19, inactivé par insertion d'une cassette dans son site EcoRI unique. La preuve est triple, comme pour un KO CRISPR : phénotype blanc sur X-gal, digestion de vérification et séquence de la jonction.intermédiaire 8 objectifs2 témoinsEnzymes de restrictionClonage dans pUC19Culture et miniprepSéquençage SangerMécanisme de CRISPR-Cas9Réparation : NHEJ et HDR
• Éteins la GFP dans des cellules HEK293 et quantifie l'éditionUne expérience d'édition complète sur la lignée HEK293-GFP (transgène EGFP unique) : transfection d'une ribonucléoprotéine Cas9/ARN guide sous poste de sécurité microbiologique, lecture du phénotype au microscope à fluorescence, puis génotypage moléculaire du locus — test T7E1 sur gel 2 % et lecture Sanger pour estimer le spectre d'indels façon TIDE.avancé 7 objectifs2 témoinsConcevoir un ARN guideRéparation : NHEJ et HDRGénotyper les clonesExpérience complète : éteindre la GFPÉlectrophorèse sur gel d'agaroseSéquençage Sanger